Buscando alternativas más saludables y eficaces en la detección de ácidos nucleicos (dsDNA, ssDNA y RNA) en células de agarosa de alta sensibilidad, Nippon Genetics ha formulado MIDORI GREEN, una nueva solución no cancerígena y menos mutagénica que el Bromuro de Etidio.
Quimirel, como representante de Nippon Genetics en Colombia, pone a su disposición este nuevo insumo para su laboratorio, el cual le permitirá obtener lecturas claras sin sacrificar la salubridad de los elementos usados.
Midori Green Advanced DNA Stain es una nueva tinción de ácido nucleico que se puede usar como una alternativa más segura a la tinción tradicional de bromuro de etidio para detectar ácido nucleico en geles de agarosa. Es tan sensible como el bromuro de etidio y se puede usar exactamente igual en electroforesis en gel de agarosa.
Midori Green Advanced DNA Stain emite fluorescencia verde cuando se une al ADN o
ARN. Tiene dos picos de excitación de fluorescencia secundarios (~ 270 nm; ~ 290 nm) y
un pico de excitación fuerte centrado alrededor de 490 nm.
La emisión de fluorescencia es centrado en ~ 530 nm. Por lo tanto, Midori Green Advanced DNA Stain es compatible con un amplia variedad de instrumentos de lectura en gel.
Midori Green Advanced DNA Stain se puede usar para geles de agarosa prefabricados y cuando se necesita una mejor sensibilidad, se recomienda posstaining.
La molécula central de Midori Green se ha formulado en tres versiones diferentes optimizadas para las necesidades de su laboratorio.
En primer lugar, está Midori Green Advance, que ofrece una excelente relación señal-ruido y una buena sensibilidad incluso para fragmentos de nucleótidos cortos. Midori Green Advance se agrega al gel de agarosa antes de analizar muestras (como el bromuro de etidio) y proporciona sensibilidad de detección a la par con EtBr cuando se visualiza con LED azules, o la novedosa tecnología de LED azul / verde de Nippon Genetics.
El segundo tinte, Midori Green Direct, está diseñado para mezclarse simplemente con su muestra y cargarlo en un gel sin tinción. Midori Green Direct tiene el colorante de carga incluido y detecta fragmentos de ácido nucleico a un nivel similar, si no un poco mejor, que Midori Green Advanced.
El miembro más nuevo de la familia es Midori Green Xtra. Al igual que “Advance”, Midori Green Xtra se agrega al gel y al tampón. Su estructura química está optimizada para la luz LED azul / verde y azul, lo que conduce a señales de fluorescencia de ADN y ARN imbatibles en geles de agarosa. Los tres tintes son compatibles con la luz UV, pero son un poco menos eficientes cuando se usa UV en lugar de la luz de excitación visible no dañina de los LED azul y azul / verde.
Más importante para los laboratorios, Midori Green Xtra no tiñe el gel de agarosa, lo que lleva a una excelente relación señal-ruido, lo que hace posible la detección de incluso las cantidades más diminutas de ADN o ARN (y ciertamente mejor que EtBr).
Prueba de Seguridad
Midori Green Advanced DNA Stain no es cancerígeno y de acuerdo con la prueba Ames causa significativamente menos mutaciones que el bromuro de etidio.
Midori Green es mucho menos dañino para los organismos vivos. En comparación con EtBr, que se conoce como un mutágeno fuerte, Midori Green causa muchas menos mutaciones en la prueba de Ames. Cuando se comparó con las mutaciones espontáneas causadas por el agua en la prueba de Ames, la tasa de Midori Green estuvo solo un poco más allá del rango de desviación estándar. Además (y en contraste con EtBr), Midori Green tiene un resultado negativo en la prueba del micronúcleo de la médula ósea del ratón y en la prueba de aberración del cromosoma, lo que indica que se considera no carcinogénico. Y para aquellos que prefieren estar seguros en lugar de lamentarse, Midori Green ha sido probado para la penetración de los guantes de látex / nitrilo, en los que ambos materiales muestran resultados negativos, incluso después de 6 horas de exposición.
Lo más importante es que Midori Green no se considera un residuo peligroso y puede eliminarse de acuerdo con los procedimientos de laboratorio estándar.
Revisa el Reporte De Seguridad de MIDORI Green aquí
Ahora con igual o mejor sensibilidad en comparación con EtBr
Los tres colorantes pueden teñir ácidos nucleicos de cadena simple y doble con sensibilidad y protocolos similares a los de EtBr. Esto lo convierte en un reemplazo directo evidente de los protocolos actuales de su laboratorio. No solo puede usar su transiluminador UV existente y sus conjuntos de filtros, los tintes Midori Green funcionan mejor cuando se combinan con azul o, en particular, con iluminadores de gel LED azul / verde e imaginadores. Estas mesas de luz respetuosas con el medio ambiente son el complemento perfecto para las manchas Midori Green, ya que puede trabajar sin escudos y sin gafas al cortar las bandas o la migración de imágenes. Y debido a que la luz azul o verde no se entrecruzan con el ADN, no debe preocuparse por dañar el ADN durante las sesiones de clonación y fotografía.
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El Midori Green ™ puede ser adquirido en Colombia a través de Quimirel, representante oficial de la marca en el país.
Para cualquier información o contacto, escríbanos al correo asesorbmolecular@quimirel.com.co, o al número 0314284277 .
Preguntas Frecuentes Del MIDORI Green
¿Puedo usar Midori Green Advance con electroforesis en gel de campo de pulso (PFGE)? Normalmente utilicé un poststaining con EtBr.
Una postconsulta se realiza con MGA por protocolo, que puede encontrar en la sección de protocolos.
¿Tiene algún detalle sobre la eliminación de Midori Green Advance por favor?
Entiendo que la molécula es sensible a la luz y me pregunté si el gel MGA podría exponerse a la luz después de su uso antes de su eliminación
El MGA no es tóxico y es suficiente para desecharlo como residuo químico de laboratorio. La emisividad de MGA será destruida por la luz, pero eso no significa que la estructura química será cambiada. Pero no es necesario destruir la molécula porque de todas formas no es perjudicial. Esa es la gran ventaja en comparación con el bromuro de etidio: que no es necesaria una eliminación especial.
¿Por qué no se pueden usar MGA y MGD de la misma manera?
Las estructuras químicas son completamente diferentes. Probamos el uso de MGD como MGA y viceversa. No podemos recomendar ambas aplicaciones. A medida que intenta utilizar MGD como MGA, necesita una gran cantidad de MGD y de escalera para obtener bandas observables. Las muestras con una concentración baja podrían no ser detectadas de esta manera. MGD fue diseñado para ser agregado a la muestra y está mucho menos concentrado que MGA. Es muy poco rentable utilizar MGD de la misma forma que MGA: se necesitan más de 10 veces la cantidad en el gel para poder observar las bandas. Cuando intenta usar MGA como MGD, también es problemático, porque MGA está demasiado concentrado y se está ejecutando en la dirección opuesta. Intenté reducir la concentración de MGA, en este caso ves algunas bandas, pero son muy débiles, independientemente de la dilución que se usa. Resumiendo puede decir que ambas manchas están diseñadas (con una fórmula estructural diferente) y optimizadas para diferentes aplicaciones (en gel y en adición a una muestra) y no se recomienda tratar de usarlas de otra manera.
¿Cuál es la diferencia entre MGA y MGD y qué tan estables son estas manchas?
La principal diferencia es que Midori Green Advance (MGA) es para gel y post tinción (significa que se usa como bromuro de etidio) y Midori Green Direct (MGD) se agrega directamente a la muestra. Dependiendo del sistema de documentación de gel, recomendamos utilizar uno u otro, pero puede usar ambos para cada iluminador (UV 302, 365 nm, iluminador azul y transiluminador azul / verde): solo se puede aumentar el rendimiento a un nivel óptimo. Por ejemplo, recomendamos usar MGA si el usuario tiene un transiluminador UV, porque los resultados son fantásticos con esa tinción. Un rendimiento realmente excelente que obtiene con nuestros instrumentos LED azul / verde y MGD, sin fondo en absoluto y una señal intensa. Ambas tinciones son estables a temperatura ambiente, por lo que el envío a temperatura ambiente no es un problema, pero le recomendamos que las manche a 4 ° C.
¿MGA y MGD trabajan con geles de agarosa y acrilamida?
Nuestros clientes nos informaron que MDG y MGA (tinción posterior) están trabajando para los geles de acrilamida, pero principalmente están diseñados para los geles de agarosa.
¿Qué sucede si almacené MGA a -20 ° C durante 6 días? ¿Estará bien para su uso?
La congelación destruye la funcionalidad de MGA. Todavía puedes intentarlo, pero nuestra experiencia pierde la iluminación después de la congelación.
Utilizo Midori Green Advance en Agarose Gels, ¿por qué las bandas pequeñas son invisibles cuando ejecuto un gel durante 35 minutos y qué recomienda?
Midori Green Advance está cargado positivamente y corre en una dirección diferente a la del ADN, por lo que el gel se destruye por la parte inferior. Para ver también pequeñas bandas puede reducir el tiempo de funcionamiento a 25 minutos. Si desea ejecutar su gel durante más tiempo, puede publicar la mancha. Puede usar la tinción en gel y luego tener un tiempo más corto para la tinción posterior o solo se tiñe su gel sin una tinción de gel previa. En ambos casos, todo el gel se teñirá y también se observarán bandas de muy bajo peso molecular. También puede usar Midori Green Direct en lugar de Midori Green Advance. Esta tinción se agrega al ADN para que todas las bandas se tiñan sin importar cuánto tiempo se ejecute el gel. Otra ventaja es el fondo inexistente. En especial, si utiliza luz LED azul o azul / verde en lugar de UV, obtendrá señales increíbles.
En la hoja de datos de Midori Green Advance, se describe que la solución postain se puede utilizar hasta 2-3 veces. ¿Durante cuánto tiempo podría usar la solución postain sin perder demasiada sensibilidad?
En realidad, tenemos clientes que lo usan más de 2 a 3 veces. Si el baño de tinción se oscurece todo el tiempo, puede usarlo en cualquier caso 2-3 veces sin ninguna reducción de la intensidad de la señal. Pero también es posible usarlo 5 a 8 veces sin una disminución de la señal, según el tamaño del gel y la cantidad de muestras. Si detecta una disminución de la intensidad, es posible agregar un poco de MGA y obtener la misma intensidad de señal que antes.
¿Puedo usar MGA después de la fecha de caducidad?
Sí, puedes usarlo. La fecha de caducidad es solo la cantidad mínima de tiempo que garantizamos, pero normalmente dura mucho más tiempo.
¿Obtengo algunas bandas adicionales después de usar MGA?
Esto es posible, si utiliza SDS en el búfer de carga.
¿Se puede usar Midori Green en un gel de poliacrilamida / urea?
Esto funciona muy bien.
¿Midori está trabajando en los geles de urea / formamida?
Lamentablemente, no está funcionando. Eso es debido a la formamida. Los geles de urea están funcionando.
¿Midori Green contiene DMSO?
Nuestros Midoris son libres de DMSO.
¿Puedo usar leadders que contengan Orange G, Bromphenol blue o Xylen cyanol FF con Midori Green Advance?
Sí, puedes usarlos. No causan problemas, solo el azul de bromfenol puede reducir la intensidad de la señal o puede llevar a la formación de nubes en el gel.
¿Puedo agregar Midori Green Advance al búfer de ejecución para reducir el deterioro del gel? En caso afirmativo, ¿en qué cantidad debo usarlo?
Puedes usar Midori Green Advance en el búfer en ejecución. Aquí debe usar alrededor de 8 µL por cada 100 ml de tampón.
¿Puedo usar Midori Green Advance con otras aplicaciones posteriores como las transferencias del sur?
Los clientes nos dicen que allí el tinte no interfiere con los protocolos estándar del Sur. No tenemos ninguna prueba a nuestro lado, ya que no hay indicios de que el colorante interfiera con los procedimientos corriente abajo del gel de agarosa y la documentación. El único problema relacionado (indirectamente) es ciertamente que no se puede hacer una comparación directa entre las transferencias Southern que se han teñido en gel (durante la electroforesis) con EtBr en los primeros experimentos y en los experimentos posteriores que emplearon el avance de MG, ya que los patrones de ejecución del gel no son directamente comparables entre estos dos colorantes (si se usan en gel). Para cualquier aplicación posterior a la tinción y flujo descendente no hay problemas conocidos.
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